在生物創新藥研發領域，精準的生物分析是推動研發進程的關鍵環節。免疫分析技術作為生物分析的重要分支，憑借其高特異性、高靈敏度的優勢，為生物創新藥研發提供了強大的支持。陽光德美憑借其先進的免疫分析平臺和專業的技術團隊，為客戶提供精準、高效的生物分析服務，助力生物創新藥研發的每一個關鍵節點，從藥物定量分析到生物標志物檢測，再到免疫原性評估，全方位滿足生物創新藥研發的需求。本文將從技術原理與應用、方法驗證、案例等多個維度，解析免疫分析技術如何助力生物創新藥研發。
免疫分析是一種基于抗原與抗體特異性結合反應的分析技術。常用的免疫分析方法包括酶聯免疫吸附測定（ELISA）、化學發光免疫分析（CLIA）、電化學發光免疫分析（ECLIA）等。ELISA是目前應用最廣泛的免疫分析方法之一，其基本原理是將藥物特異性抗體固定在固相載體上，加入待測樣本后，藥物分子與抗體結合形成免疫復合物。隨后加入酶標記的二抗，與免疫復合物結合。最后加入底物，酶催化底物產生顏色反應，通過測定吸光度值來定量藥物濃度。
在生物創新藥的臨床前及臨床研究階段，免疫分析技術發揮著至關重要的作用。在藥代動力學研究中，可定量測定生物樣品（如血液、組織等）中藥物的濃度，繪制藥物濃度 - 時間曲線，從而評估藥物的吸收、分布、代謝和排泄過程，為藥物的劑量設計和給藥方案優化提供科學依據。在藥效學研究方面，免疫分析技術可用于監測生物創新藥的藥效學指標，揭示藥物的作用機制。例如，檢測藥物作用后生物樣本中生物標志物的水平變化，如細胞因子、受體表達水平等，來評價藥物的治療效果。對于腫瘤免疫治療藥物，通過檢測外周血中細胞因子水平，可早期預測藥物療效，助力個性化醫療發展。生物創新藥可能會引發機體的免疫反應，產生抗藥物抗體（ADA）。免疫分析平臺能夠檢測ADA的存在與否及其濃度水平，評估藥物的免疫原性風險。這對于藥物的安全性評估和風險管理至關重要。在免疫原性分析中，除了檢測 ADA 外，還需要對中和抗體（NAb）進行檢測。NAb 是指能夠與藥物結合并中和其生物活性的抗藥物抗體。NAb 的存在可能顯著影響藥物的療效，因此檢測 NAb 的活性對于評估藥物的免疫原性風險和臨床效果至關重要。
為確保免疫分析結果的準確性、可靠性和可重復性，陽光德美嚴格遵循ICH M10以及《藥物免疫原性研究技術指導原則》等國內外先進標準，建立了嚴謹完善的質量控制體系。在方法驗證環節，針對免疫分析方法開展了全面且細致的驗證工作，覆蓋從方法建立到樣品檢測的全流程。依據 ICH M10，對于采用配體結合分析法（LBA 法）的免疫分析技術，重點對方法的特異性、選擇性、標準曲線、精密度和準確度、稀釋線性和鉤狀效應、樣品穩定性等指標進行驗證。◆ 特異性：特異性是指方法能夠準確識別和定量目標藥物分子，不受其他成分干擾的能力。驗證時需向空白基質樣本中加入相關分子（在研究樣本中預期的最大濃度）來評估特異性，在相關分子存在的情況下，應在最低檢測限（LLOQ）和最高檢測限（ULOQ）處評估目標分析物的準確性。◆ 選擇性：基質中可能含有非特異性基質成分，如降解酶、嗜異性抗體或類風濕因子，這些成分可能會干擾目標分析物。選擇性是指在存在非特異性基質成分的情況下，該方法檢測和區分目標分析物的能力。◆ 標準曲線：標準曲線的確定需考察分析方法在一定濃度范圍內，響應值與分析物濃度之間是否呈線性關系。◆ 準確度與精密度：準確度指測得藥物濃度與真實濃度的接近程度，精密度表示多次測量結果的一致性。需使用多個濃度水平的質控樣品進行評估。◆ 稀釋線性和鉤狀效應：評估將高濃度樣本稀釋后能否準確測量，確認測量濃度不受稀釋的影響；驗證高于標準曲線定量上限（ULOQ）的樣本濃度不受鉤狀效應（即由分析物高濃度引起的信號抑制）的影響，從而避免產生錯誤結果。
◆ 穩定性：驗證基質中的待測物在樣本制備、處理以及儲存過程中的穩定性，包括凍融穩定性、短期穩定性和長期穩定性等。
◆ 平行性：平行性是指標準曲線與系列稀釋的研究樣本之間的平行關系，用于檢測稀釋對分析物測量的任何影響。一般在研究樣本分析期間進行。應使用空白基質將高濃度（最好接近最大血藥濃度Cmax）的研究樣本稀釋至少三種濃度。免疫原性分析方法驗證主要針對ADA和NAb的檢測，需遵循《藥物免疫原性研究技術指導原則》，重點關注以下方面：
◆ 靈敏度：方法靈敏度是指陽性對照樣品檢測結果持續為陽性或讀數等同于該檢測方法臨界值的最低濃度。方法靈敏度并不是為了確定受試者體內抗藥抗體的絕對量，而是為了更全面地理解檢測方法的性能。◆ 藥物耐受：生物樣本中可能含有高濃度的游離受試藥物，可以與捕獲試劑/檢測試劑競爭結合抗藥抗體，進而干擾抗藥抗體檢測導致假陰性結果。◆ 精密度與準確度：待測樣本的檢測通常是在不同的分析時間、分析批（板）、分析儀器及分析員之間進行的，因此分析方法應滿足相應的精密度要求，并分別考察篩選試驗精密度、確證試驗精密度和滴度試驗精密度。◆ 特異性：特異性是指某種方法對于某一目標分析物的專屬檢測能力，特異性較低可能導致假陽性結果。應采用添加或未添加藥物或其相關物質的陰性對照樣品和低濃度陽性對照樣品進行特異性考察。◆ 選擇性：選擇性是指分析方法能夠在樣本中存在其他成分的情況下檢出特異性針對該藥物的抗藥抗體的能力。篩選試驗、確證試驗中采用至少10個空白個體基質在空白水平、低濃度陽性對照水平考察選擇性，確保至少80%個體的選擇性考察結果符合方法學驗證的預期接受標準。有些情況下，需考察溶血或高脂對樣本檢測的影響。◆ 鉤狀效應：鉤狀效應是指由于存在高濃度的特異性的被分析物或者抗體，出現信號值減少，從而可能導致假陰性信號。通過在混合基質中加入陽性對照抗體進行一系列稀釋的方法來進行評估。◆ 穩定性：驗證 ADA 在樣本制備、處理、分析以及儲存過程中的穩定性。陽光德美擁有設備先進、技術領先的免疫分析平臺，配備了多臺國際前沿的免疫分析儀器，如酶標儀、MSD、Simoa、Luminex、ELISpot 等 。這些儀器各有所長，為不同類型的免疫分析需求提供了多樣化的解決方案。
（1）酶標儀是應用最為廣泛的免疫分析儀器。陽光德美配備了Spectra Max M5、BioTek H1M酶標儀，具有操作簡便、成本相對較低、結果穩定等優點。陽光德美利用酶標儀開展了大量的基礎免疫分析工作，如抗原抗體的定性定量檢測、藥物免疫原性研究等 。（2）MSD（電化學發光多因子檢測技術）則以其寬動態范圍、高靈敏度和多指標同時檢測的能力著稱。該技術能夠在同一反應體系中同時檢測多個不同的生物標志物，大大提高了檢測效率和樣本利用率。在腫瘤免疫治療藥物研發中，可同時檢測多種細胞因子（如白細胞介素 - 2、干擾素 -γ 等）的變化，全面評估藥物對機體免疫微環境的影響 。（3）Simoa（單分子陣列技術）作為超高靈敏度的免疫分析技術，能夠檢測到極低濃度的生物標志物，其檢測下限可達飛克級別。在檢測生物樣品中含量極低的細胞因子、神經遞質等物質時具有獨特優勢，為生物創新藥研發中對微量生物標志物的監測提供了可能。陽光德美在助力神經系統疾病藥物研發中，使用該儀器進行檢測腦脊液中低豐度的神經損傷標志物，助力藥物療效的精準評估 。更多內容參見《生物分析專欄|痕量檢測技術助力生物分析》。（4）Luminex 液相懸浮芯片技術基于微球陣列，可實現高通量、多指標的快速檢測。通過對不同顏色編碼微球上的抗原或抗體與樣本中目標物質的特異性結合反應進行檢測，能夠在短時間內獲取豐富的信息。陽光德美使用該儀器進行多重細胞因子檢測，大大提高了檢測效率，助力藥物研發 。（5）ELISpot（酶聯免疫斑點試驗）用于檢測單細胞水平的細胞因子分泌或抗體分泌細胞，在細胞免疫治療藥物研發中，可用于評估 T 細胞、B 細胞等免疫細胞的功能，如檢測 CAR - T 細胞治療后患者體內 T 細胞分泌細胞因子的能力，為治療效果的評估提供關鍵數據 。除了先進的儀器設備，陽光德美免疫分析平臺還擁有一支經驗豐富、專業素養極高的核心技術團隊。團隊成員均在醫藥研發領域擁有近20 年的研究經驗，行業積累深厚。他們不僅能夠熟練運用各類免疫分析技術，提供高質量、高效率、全方位的優質分析檢測服務，還具備強大的科研創新能力，能夠針對客戶的特殊需求，提供高端定制化解決方案 。陽光德美積累了豐富的免疫分析項目經驗，涵蓋多種生物創新藥類型，如抗體藥物、核酸藥物、多肽藥物等。在生物標志物檢測方面，完成了多個項目的多指標檢測，為藥物的藥效學研究提供了有力支持。同時，在免疫原性分析方面，成功開發并驗證了多種藥物的 ADA和NAb 檢測方法，能夠準確評估藥物的免疫原性風險。內皮素1(ET-1)也被稱為前內皮素1(PPET1)，由21個氨基酸組成的多肽，是一種有效的血管收縮劑。ET-1在臨床上的應用包括：可用作預測生物標志物、藥效學生物標志物和預后性生物標志物。在正常人體內，含量非常低。陽光德美采用ELISA平臺，遵循ICH M10的要求進行完整的方法學驗證，實現LLOQ水平（0.391 pg/mL）的精準定量，并將所建立的分析方法應用于臨床樣本的生物分析，為藥物臨床PK/PD相關性研究提供了數據支持。呼吸道合胞病毒（RSV）是引起嬰幼兒季節性下呼吸道感染最為重要的原因，也是導致新生兒因病毒感染而死亡的重要因素，目前國內尚無用于防治RSV感染的疫苗和特效抗病毒藥物上市。某RSV創新藥物為全人源化RSV單克隆抗體，是國內頭部的藥企開發用于治療RSV感染。前期研究結果表明其具有良好的中和活性，研發成果具有較高的臨床價值和商業價值，有望填補國內RSV治療領域的空白。陽光德美采用ELISA法進行PK和免疫原性研究，采用微量中和滴定法進行各個劑量組中血清抗RSV中和抗體滴度水平的變化，高效、高質量地推進了該藥物的臨床PK、PD及免疫原性研究，為該藥物的安全性和有效性評價提供有力的數據支持。為確保免疫分析結果的準確性、可靠性和可重復性，陽光德美建立了嚴格完善的質量控制體系。參照國內外先進的質量管理標準，對實驗操作流程、儀器設備的管理、人員培訓與考核、數據記錄與處理等各個環節進行精細化管理 。在實驗操作方面，制定了詳細的標準操作規程（SOP），涵蓋從樣本采集、處理、儲存到檢測分析的全過程，確保每一步操作都符合規范要求。定期對儀器設備進行校準、維護和性能驗證，保證儀器處于最佳工作狀態。加強對人員的培訓與考核，不斷提升員工的專業技能和質量意識。對數據進行嚴格的記錄、審核和存儲，確保數據的完整性和可追溯性 。同時，陽光德美積極關注免疫分析技術的前沿發展動態，不斷推動技術創新與應用拓展。與國內外知名科研機構、高校保持緊密的合作交流，共同開展前沿技術研究和項目合作。參與行業內的學術會議、研討會等活動，及時了解最新的研究成果和技術趨勢，并將其引入到公司的研發服務中 。在未來，隨著生物創新藥研發的不斷深入和市場需求的持續增長，免疫分析技術將提供更加精準、高效和可靠的分析保障，推動生物制藥行業的持續發展。陽光德美也將繼續秉承專業、創新、高效的理念，不斷提升免疫分析平臺的技術實力和服務水平，為全球生物創新藥研發事業貢獻更多的智慧與力量，助力更多創新藥物的成功研發，造福廣大患者 。如果您在生物創新藥研發過程中有PK/PD、生物分析和免疫原性研究需求，歡迎聯系陽光德美生物分析團隊！我們將竭誠為您服務，攜手共創創新藥研發的美好未來。
